A coloração de Gram deve o seu nome ao bacteriologista dinamarquês Hans Christian Gram que desenvolveu o protocolo em 1884. É uma coloração que permite destacar as propriedades da parede bacteriana e usar essas propriedades para distinguir e classificar as bactérias. Sua vantagem é fornecer informações rápidas, fáceis e econômicas sobre as bactérias presentes em um produto ou meio, tanto no tipo quanto na forma.
Assim, os cientistas podem distinguir as bactérias Gram-positivas - também conhecidas como “Gram-positivas” - com uma única parede com grande quantidade de peptidoglicano , das bactérias Gram-negativas, compostas por menos peptidoglicano, mas com uma membrana externa adicional. Este tipo de classificação tem consequências na área médica (a resistência das bactérias e a eficácia dos antibióticos dependendo do tipo de bactéria).
Requer um esfregaço fixo, também
Aqui estão os diferentes estágios dessa coloração:
As etapas 1 e 2 colorem o conteúdo das bactérias de roxo . A violeta de genciana se liga aos componentes citoplasmáticos de todas as bactérias. Lugol corrige essa coloração interna.
O passo 3 (álcool) é usado para descolorir o citoplasma de bactérias que serão consideradas “ Gram negativas ”. Na verdade, eles têm uma parede pobre em peptidoglicanos - portanto mais finos - que deixará o álcool (molécula hidrofílica ) ou a mistura de álcool-acetona passar, e que descolorirá o citoplasma ao eliminar a violeta de genciana. Ao contrário, para as chamadas bactérias “ Gram positivas ” , a parede constitui uma barreira impermeável ao álcool, pois é composta por uma “camada” maior de peptidoglicanos. A parede é, portanto, mais espessa. A bactéria permanecerá então na cor roxa.
O passo 4 é uma contracoloração com o objetivo de dar às bactérias Gram-negativas previamente descoloridas uma coloração rosa permitindo que sejam visualizadas ao microscópio. As bactérias Gram-positivas permaneceram violetas obviamente insensíveis a este contra - cor mais pálida do que o roxo que impregna seu citoplasma.
A coloração de Gram, portanto, torna possível diferenciar a parede bacteriana e dividir as bactérias em dois grandes grupos:
Essas diferenças de coloração e as diferenças de forma ( bacilo ou cocos ) são a fonte da classificação das bactérias.
Nota : Certas bactérias permanecem insensíveis a esta coloração, é o caso, entre outras, dos Mollicutes , ou denominados Ténéricutes, uma das três classes principais de Eubacteria (Gracilicutes, Firmicutes, Ténéricutes). Na verdade, essas bactérias são desprovidas de parede e parecem Gram -.
A coloração de Gram é freqüentemente usada em microbiologia para detectar bactérias Gram positivas ou negativas. Isso permite diferenciar e classificar as diferentes populações de microrganismos. Por exemplo, quando há suspeita de infecção do organismo em uma biópsia, essa coloração pode ser usada seguida de uma análise histopatológica para fazer o diagnóstico. Esse método tem a vantagem de ser mais rápido do que uma cultura convencional.
As bactérias detectadas são classificadas em duas categorias. A título de exemplo:
O objetivo deste método é confirmar rapidamente se uma bactéria é Gram positiva ou Gram negativa, sem passar pelas etapas de coloração usuais e sem usar um microscópio. Basta colocar em contato (em uma lâmina de microscópio) uma colônia isolada com uma gota de solução de hidróxido de potássio ( KOH ) a 3%. Usando uma pipeta Pasteur , misturamos. Alguns segundos depois, puxamos a mistura para cima. Se um filamento se formar entre a pipeta e a lâmina, a colônia isolada consiste em bactérias Gram negativas; se nada for arrastado pela pipeta, estamos lidando com bactérias Gram positivas. O método foi proposto como um controle de qualidade para a coloração de Gram em 1977. Durante uma avaliação (John Buck, 1982), os resultados obtidos por este método em 400 cepas de bactérias marinhas foram confirmados pela coloração de Gram.