Iodeto de propídio | |
Identificação | |
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Nome IUPAC | Diiodeto de 3,8-diamino-5- [3- (dietilmetilamônio) propil] -6-fenilfenantridínio |
N o CAS | |
N o ECHA | 100.042.786 |
N o EC | 247-081-0 |
PubChem | 424898 |
SORRISOS |
c1cc2c (c3ccccc3) [n +] (CCC [N +] (CC) (CC) C) c3c (c2cc1) ccc (N) c3. [IH -]. [IH-] , |
InChI |
InChI: InChI = 1 / C27H33N4.2HI / c1-4-31 (3,5-2) 17-9-16-30-26-19-22 (29) 13-15-24 (26) 23- 14-12-21 (28) 18-25 (23) 27 (30) 20-10-7-6-8-11-20 ;; / h6-8,10-15,18-19,29H, 4- 5,9,16-17,28H2,1-3H3; 2 * 1H / q + 1 ;; / p-1 |
Aparência | sólido: vermelho escuro; em solução: vermelho escuro a laranja dependendo da concentração. |
Propriedades quimicas | |
Fórmula bruta |
C 27 H 34 I 2 N 4 [Isômeros] |
Massa molar | 668,3946 ± 0,0248 g / mol C 48,52%, H 5,13%, I 37,97%, N 8,38%, |
Propriedades físicas | |
Fusão T ° | 210 a 230 ° C (decomposição) |
Propriedades ópticas | |
Fluorescência | À excitação 305 nm e 538 nm ; λ emissão 617 nm |
Precauções | |
Diretiva 67/548 / EEC | |
XI Classificação : mutagénico, irritante, suspeito de carcinogéneo Símbolos : Xi : Irritante Frases R : R36 / 37/38 : Irritante para os olhos, vias respiratórias e pele. Frases S : S26 : Em caso de contato com os olhos, lavar imediata e abundantemente com água e consultar um especialista. Frases R : 36/37/38, Frases S : 26, |
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Ecotoxicologia | |
DL 50 | 16 mg · kg -1 (camundongo, sc ) |
Unidades de SI e STP, salvo indicação em contrário. | |
O iodeto de propídio (IP, em inglês propidium iodide , PI) é um agente intercalante de ácidos nucléicos (o DNA ou RNA) e uma molécula fluorescente com peso molecular de 668,403 Da . O iodeto de propídio é comumente usado como marcador de DNA para marcar o núcleo das células que perderam a integridade da membrana (fenômeno característico da necrose ).
Assim como o brometo de etídio (BEt), o iodeto de propídio (PI) é um agente intercalante usado como marcador de ácidos nucléicos. Ele se liga às bases do DNA com pouca ou nenhuma especificidade de sequência e seguindo uma estequiometria de uma molécula para 4-5 pares de bases. PI também pode se ligar ao RNA ; é por isso que o tratamento com nucleases ( RNases ) é necessário para degradar o RNA e, assim, evitar qualquer falso positivo. Por outro lado, uma molécula de PI de ligação ao ácido nucleico é 20 a 30 vezes mais fluorescente do que uma molécula livre em solução, o máximo de excitação sendo deslocado em cerca de 30 a 40 nm em direção ao vermelho e o máximo de emissão deslocado em cerca de 15 nm em direção ao azul. O IP é usado em imagens celulares ( microscopia de fluorescência , microscopia confocal ), por citometria de fluxo ou por fluorometria .
Seu uso principalmente em imagens de células e citometria de fluxo é explicado por sua relativa lipofobia. Na verdade, ao contrário do brometo de etídio, que tem a capacidade de atravessar as membranas plasmáticas com relativa facilidade, o PI por seu segundo quaternário de amônio tem uma lipofobia (ou hidrofilicidade) relativamente maior. Isso o torna um poderoso marcador de viabilidade celular: de fato, uma célula viável tem integridade de membrana, o PI sendo então incapaz de penetrar e se ligar ao DNA presente na célula, ao contrário de uma célula morta cuja membrana permeabilizada será capaz de deixar entrar o PI que se ligará ao DNA.
Além disso, o PI pode ser usado em paralelo com outros marcadores fluorescentes (técnicas de multi-rotulagem). Assim, o IP é compatível com marcação direta ou indireta por anticorpo, com marcação in situ hibridização ou mesmo com marcação utilizando fluoróforos específicos para estruturas celulares.
Na citometria de fluxo, um marcador de fluorocromo é usado: anexina V-FITC marca as células em apoptose. Durante este fenômeno, as células expõem na face externa de sua membrana plasmática certos fosfatidilos e, entre outros, a fosfatidilserina, que é normalmente encontrada na face interna da membrana plasmática (o que permite que outras células saibam quais células estão em fase de apoptose). A anexina V-FITC, portanto, liga-se a fosfatidilserinas, tornando possível diferenciar células apoptóticas de células vivas. No entanto, durante a necrose, a membrana plasmática da célula explode parcialmente, torna-se porosa e a célula, portanto, expõe suas fosfatidilserinas ao ambiente externo. Uma célula necrótica é, portanto, também marcada pela anexina V-FITC. Uma segunda marcação é então realizada com iodeto de propídio, que só fixa as células quando a membrana plasmática é porosa. Em outras palavras, o PI pode se ligar a células necróticas (por causa de uma membrana porosa), mas não em células apoptóticas (por causa de uma membrana não porosa). Os seguintes resultados são assim obtidos em fluido x citometria:
Uma das aplicações do PI em biologia vegetal diz respeito à marcação de paredes celulares. De fato, é possível observar, seguindo a marcação de IP, o contorno das células, o IP remanescente ao redor das células dentro da parede do tecido vegetal observado. Assim, é possível, por exemplo, observar por microscopia confocal o contorno das células do tecido radicular das sementes de Arabidopsis thaliana . É então possível localizar com precisão em qual parte da raiz pode expressar um gene de interesse se este último foi fundido com o gene que codifica GFP .
Embora nenhuma folha ainda tenha sido publicada pelo INRS sobre PI, é um produto nocivo. Deve ser manuseado com cuidado e embora sua relativa lipofobia limite sua rápida penetração nos tecidos, o uso de luvas de látex ou mesmo de nitrila é imprescindível.